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產(chǎn)品中心蛋白與免疫顯色成像AP34L024/AP34L025EZ ECL pico化學(xué)發(fā)光液（超敏型）
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EZ ECL pico化學(xué)發(fā)光液（超敏型）是一款增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（ECL）HRP底物，可幫助用戶在免疫印跡分析過(guò)程中實(shí)現(xiàn)低皮克級(jí)的蛋白檢測(cè)（<10-12g），極其節(jié)省抗體。本產(chǎn)品一抗?jié)舛确秶?.2-0.1μg/ml（以1 µg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:1,000至1:5,000倍）；二抗?jié)舛?0-50ng/ml（以1 mg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:20,000至1:100,000倍）。
產(chǎn)品分類
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| 品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號(hào) | AP34L024/AP34L025 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 100mL | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| EZ ECL pico化學(xué)發(fā)光液（超敏型） | AP34L024 | 100 mL |
| EZ ECL pico化學(xué)發(fā)光液 （超敏型） | AP34L025 | 500 mL |
| 組分名稱 | A液 | B液 |
| AP34L024（100 mL） | 50 mL | 50 mL |
| AP34L025（500 mL） | 250 mL | 250 mL |
取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20~60 min，同時(shí)振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)。
將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1 h，同時(shí)振蕩；或在28℃孵育過(guò)夜，不振蕩。
將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5 min，更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4~6次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。
【注】：①孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率。②按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的。
將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1 h，同時(shí)振蕩。
重復(fù)步驟3，以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。【注】：膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行*洗滌。
將A溶液與B液等比例混合，制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1 mL工作液，工作液可以在溫室下穩(wěn)定8 h。
【注】：暴露于日光或其他強(qiáng)光下可能損害工作液，為獲得最佳結(jié)果，請(qǐng)將此工作液保存在琥珀色瓶中光；實(shí)驗(yàn)室的常見(jiàn)照明不會(huì)損害工作液。
將印記膜在工作液中孵育5 min。從工作液中取出印記膜，并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙（膜）中，用一張吸水紙吸除多余的液體，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中，蛋白質(zhì)面朝上，除適用于膠片曝光的燈（如紅色安全燈）之外，關(guān)閉所有的燈。
【注】：①膠片必須在曝光期間保持干燥；②確保將多余的底物從膜和塑料紙上*去除；③在整個(gè)膠片處理期間，使用手套。
將X光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光60 s。之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到最佳結(jié)果。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5~30 min期間是強(qiáng)烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí)，但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降，如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光，曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。如果使用磷光存儲(chǔ)成像設(shè)備（如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng)）或CCD照相機(jī)可能需要較長(zhǎng)的曝光時(shí)間。
【注】：膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。
使用合適的顯影劑和定影劑對(duì)膠片進(jìn)行顯影。如果信號(hào)太強(qiáng)，則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測(cè)。
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
為獲得最佳效果，必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分，包括樣品量、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類型。
使用本產(chǎn)品比使用沉淀比色HRP底物檢測(cè)所需的抗體濃度低。為優(yōu)化抗體濃度，請(qǐng)進(jìn)行一次系統(tǒng)的點(diǎn)印跡分析。
沒(méi)有一種封閉試劑對(duì)所有系統(tǒng)而言都是最佳的，所以為每一個(gè)免疫印跡檢測(cè)系統(tǒng)找到最合適的封閉緩沖液非常必需。封閉試劑有可能與抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性信號(hào)。封閉緩沖液同時(shí)也會(huì)影響系統(tǒng)的靈敏性。當(dāng)從一種底物轉(zhuǎn)換為另一種底物時(shí)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)信號(hào)衰減或背景增加的現(xiàn)象，原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測(cè)系統(tǒng)。
使用親和素/生*素檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，避免使用牛奶作為封閉試劑，因?yàn)榕Ｄ讨泻胁欢康膬?nèi)源性生*素，會(huì)導(dǎo)致高背景信號(hào)。
保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液、抗體溶液和底物工作液的使用體積，以確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中印跡膜*被液體覆蓋，避免膜變干。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號(hào)。
為獲得最佳效果，在孵育步驟請(qǐng)使用搖床。
將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液，以降低非特異信號(hào)。使用高品質(zhì)的產(chǎn)品，如去污劑。它保存在安瓿中，過(guò)氧化物和其他雜質(zhì)含量很低。
不要使用diedanna作為緩沖液的防腐劑。diedanna是HRP的抑制。
避免手與膜直接接觸，實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子。
所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來(lái)物質(zhì)。金屬器械（如剪刀）不得具有可見(jiàn)的銹跡。銹跡可能導(dǎo)致斑點(diǎn)形成和高背景。
底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8 h。日光或任何其他強(qiáng)光下可能損害底物，為獲得最佳結(jié)果，將底物工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長(zhǎng)期暴漏在任何強(qiáng)光下，短時(shí)間暴漏于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。
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